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化學發(fā)光免疫分析CLIA是繼酶免分析技術(shù)(EIA)、放射免疫分析技術(shù)(RIA)、熒光免疫分析技術(shù)(FIA)、時間分辨熒光免疫分析技術(shù)(TRFIA)之后新興的免疫分析技術(shù),檢測速度快、靈敏度高、特異性高且自動化程度高。
不同化學發(fā)光試劑區(qū)別:
吖啶酯并不是CLIA中唯一的化學發(fā)光試劑,還有魯米諾、異魯米諾、金剛烷二氧環(huán)乙烷、三聯(lián)吡啶釕等。
魯米諾,需要過氧化物酶如POD或HRP的催化,對反應環(huán)境的pH要求以及溫度要求較高;異魯米諾較魯米諾發(fā)光體系發(fā)光效率低,但其苯環(huán)上的氨基可以進行官能團取代,提高發(fā)光效率并且方便標記。
金剛烷二氧環(huán)乙烷,金剛烷體系需要堿性磷酸酶參與,同樣易受環(huán)境pH值、溫度等因素影響。
三聯(lián)吡啶釕是電化學發(fā)光體系,儀器設備的性能要求較高,清洗條件要求苛刻。
而吖啶酯屬于直接化學發(fā)光,不需要酶的催化,且可以直接標記蛋白、抗體、核酸等。具有背景低、標記工藝簡單、標記后光量子產(chǎn)率不減少、發(fā)光時間短、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,目前綜合優(yōu)勢較大。
光澤精,同樣含有吖啶結(jié)構(gòu),與吖啶酯較類似,早期使用較多;還有過氧草酸酯等,使用較少。
吖啶酯化學發(fā)光特點:
吖啶酯化學發(fā)光為閃光型,在化學發(fā)光免疫分析領域與其它技術(shù)相比具有優(yōu)勢,吖啶酯化學發(fā)光在加入啟動劑0.4s后發(fā)射光強度達到最大,半衰期為0.9s,2s內(nèi)發(fā)光基本結(jié)束,可以實現(xiàn)快速檢測。吖啶酯標記工藝簡單,標記反應一步完成,發(fā)光過程只需要在堿性條件下,經(jīng)過氧化氫氧化就可以直接發(fā)光,不需要其它發(fā)光催化劑。
為了使吖啶酯適應不同的蛋白質(zhì)、抗體、核酸的研究實驗,可進行官能團的取代使其性能更好,比如吖啶磺酰胺、便于標記的NHS酯等。根據(jù)不同的官能團取代,德晟研發(fā)生產(chǎn)的吖啶酯目前已有6種。